經武漢市人民政府批準，武漢軌道交通5號線、6號線二期、16號線（漢南線）工程將于2021年12月26日上午9:56同步開通初期運營。屆時，6號線二期工程與一期工程貫通運營，武漢地鐵運營里程將突破400公里，達到435公里，車站數量增至282座。

開通當天，5號線、6號線二期工程的運營時間為9:56至23:00，16號線運營時間為9:56至22:30，市民乘客可前往相關車站乘車。

12月27日起，工作日5號線、6號線運營時間為6:00至23:00，16號線運營時間為6:00至22:30；雙休日5號線、6號線運營時間為6:30至23:00，16號線運營時間為6:30至22:30。國家法定節假日及其他特殊情況另行通知。

5號線南起中醫藥大學，北至武漢站東廣場，南北向貫穿武昌全鎮，線路全長約35.1公里，設站25座，其中地下站21座，高架站4座。全線按武漢站東廣場站至中醫藥大學站單一交路組織運營。5號線為武漢市首條全自動運行地鐵線路，全線列車從喚醒檢查、進入正線、結束運營返回段場休眠，全過程無需人工操作。

6號線二期工程起于一期工程終點站金銀湖公園站，止于新城十一路，線路全長7公里，均為地下線，設站5座。6號線二期工程與一期工程貫通，按東風公司站至新城十一路站單一交路組織運營。

16號線起于周家河，沿線經過漢南紗帽大道、馬影河大道、漢洪高速東側、經開大道、沌口路，終點為國博中心南站，線路全長33.1公里，設站12座，其中地下站7座，高架站5座。全線按周家河站至國博中心南站單一交路運營。開通初期運營期間，周家河站末班車22:00發出，前往國博中心南站；國博中心南站末班車22:30發出，前往周家河站。

另悉，新線開通當日起，軌道交通陽邏線調整運營時間，金臺站末班車發車時間延長半小時。全線工作日運營時間為6:00至22:30，休息日運營時間為6:30至22:30。金臺站末班車22:00發出，前往后湖大道站；后湖大道站末班車22:30發出，前往金臺站。